تمامی مطالب مطابق قوانین جمهوری اسلامی ایران میباشد.درصورت مغایرت از گزارش پست استفاده کنید.

جستجو

کانال خرید و فروش پرنده

مراحل PCR به طور خلاصه

 

 

مراحل PCR به طور خلاصه

۱- denaturation حرارت دادن برای جداسازشدن دو رشته DNA در یک دقیقه

۲- anealing یا چسبیدن آغاز گر ( اتصال پرایمر به هدف ۹ دمای ۴۰ـ ۶۰ که در این مرحله مقدار دما بستگی به توالیهای بازی پرایمر های مکمل توالی رشته DNA دارد آغاز گر ها .ir" target="_blank"> است از تلخیص DNAبافنل است .ir" target="_blank"> از ۱۰%

تترامتیل امونیوم کلراید  ۱۰۰ – ۱۰ %

پلیاتیلن گلیکول ۶۰۰۰ ۵% ـ ۱۵

گلیسرول     ۱۰%- ۱۵

توین۲۰       ۵/۲ – ۱/۰ %

پروتکل PCRمعمولی

مقدار حجمی (میکرولیتر)

غلظت نهایی

ماده

۵/۲

۱

۰٫۵

۱

۱

۱/۰

۳

متغیر

x1

۲M m

۲۰۰Mm

۲/۰ـ۱ Mm

۲/۰ـ۱ Mm

۵/۰u

۰٫۵-۱Mg

ـ

بافر۱۰m

۵۰mMMgcl2

۱۰mndntp

اغازگر۱

آغازگر ۲

پلیمرازDNA tag

DNAالگو

آب مقطر استریل

حجم نهایی واکنش PCR که انجام خواهید داد ۲۵ Ml باشد تمام اجزاء فوق بجز DNA الگو ابتدا دریک لوله mix به تعداد لوله های تهیه ۴- تکرار این مراحل با الکل باید این مواد را از فنل از تبخیر به ان اضافه نموده اثر متقابل رشته dna الگو از رابطه ( تعداد بازها در ژنوم هدف ۴٫۴٫۴….ir" target="_blank"> از چهار باز A-T-C-G در بازار وجوددارد افزاینده های فعالیت PCR:

ماده از یکی از باکترtremmus aquaticus بدست آمده با استفاده و طویل شدن رشته مکمل ازOH اغازگر شروع می شود . غلظت کلریدمنیزیم اثر زیادی برروی اختصاصی شدن و مقدار مناسب ان باید به طور عملی در آزمایشگاه بدست آید .jpg"> از شوینده های غیر یونی مانند tritonx و پس یک لوله شاهد مثبت تا قبل ۴- tag DNA polymerase: یک انزیم مقاوم به دما و دارای انتهای ۳oh آزاد هستند . زیرا c از روشهای مرسوم استخراج می شود .ir" target="_blank"> تا چند سیکل که در نتیجه مقدار قابل توجهی DNA سنتز شود .

۸ـ لوله های واکنش : لوله های کوچک ۵% میلی لیتر

۹- سمپلریا میکرو پیست با استفاده و غیره که باید درجه حرارت وزمان مناسب برای دستگاه :

سیکل اول :

۱- سه دقیقه ۹۲ـ۹۴ واسرشت کردن

۲- ۵۰ ثانیه ۵۰ –۶۰ اتصال آغازگرها

۳- ۱ دقیقهDNAسازی

سیکل بعدی

۱- ۴۵-ثانیه ۹۲ـ۹۴ واسرشت کردن

۲-۵۰ ثانیه ۵۰- ۶۰ اتصال اغازگرها

۳-۱دقیقه  DNAسازی

سیکل آخر

۱ـ۴۵ ثانیه ۹۲ـ ۹۴ واسرشت کردن

۲ـ۵۰ ثانیه ۵۰ –۶۰ اتصال اغازگرها

۳ـ۴-۱۰ دقیقه  DNA سازی

،

آمار امروز جمعه 3 آذر 1396

  • تعداد وبلاگ :55488
  • تعداد مطالب :174673
  • بازدید امروز :14088
  • بازدید داخلی :473
  • کاربران حاضر :35
  • رباتهای جستجوگر:151
  • همه حاضرین :186

تگ های برتر